在冠狀病毒2019-nCoV的分子生物學研究中,電泳技術是一個重要方法,主要用于核酸、蛋白質的分離與鑒定,使用的實驗儀器主要是電泳儀。本文,樂楓純水為大家總結了實驗中常出現(xiàn)的問題和解決方法。
一、什么是核酸電泳?
核酸電泳是基因操作的核心技術之一,用于分離、鑒定DNA、RNA 分子混合物和純化DNA小片段。
二、核酸電泳異常條帶問題
核酸電泳實驗中,常常會遇到條帶模糊、拖尾、扭曲等現(xiàn)象,究其原因,除了操作不當,電泳條件未優(yōu)化,電泳緩沖液也是重要的影響因素之一。電泳緩沖液的組成及其離子強度影響DNA的電泳遷移率。
表1 核酸電泳條帶異常的原因匯總及建議的解決方法
常見問題 | 原因 | 解決方法 |
條帶模糊 | 核酸降解 | 使用不含核酸酶的超純水配置緩沖液 |
電泳緩沖液陳舊 | 建議經常更換緩沖液 | |
有蛋白污染 | 使用低有機物的超純水配置緩沖液 | |
核酸變性 | 使用超純水或者緩沖液稀釋樣品 | |
條帶黯淡 | 核酸濃度過低 | 增加上樣量 |
核酸降解 | 使用不含核酸酶的超純水配置緩沖液 | |
條帶被示蹤染料掩蓋 | 避免使用與目的片段遷移率相同的示蹤染料 | |
拖帶或涂抹帶 | PCR體系或PCR程序不合適 | 優(yōu)化PCR體系和PCR程序 |
條帶扭曲 | 配膠緩沖液和電泳緩沖液不同 | 配膠和電泳中使用同一批緩沖液 |
電泳時電壓過高 | 控制電泳時電壓不超過6V/CM |
三、核酸電泳用純水要求
為了防止水中雜質(如:核酸酶、蛋白質、離子等)對電泳結果的影響,核酸電泳實驗配置緩沖溶液或稀釋樣品需要使用超純水:
● 電阻率 18.2 MΩ·cm
●TOC < 10 ppb
● 無核酸酶
● 細菌總數(shù)< 1 CFU/mL
● 熱原< 0.005 EU/mL
● 0.22 μm 或更低的顆粒過濾
四、核酸電泳用純水機推薦
樂楓生物新一代Genie系列智能純水系統(tǒng)是一款專注于解決用戶需求的實驗室純水機。Genie系列智能純水系統(tǒng)采用樂楓理念——無線連接、“1+N”模式,具有系統(tǒng)智能化、設計人性化、水質標準化三大特色。
廣州某疾控中心安裝的Genie G以自來水為進水產EDI純水和超純水
荷蘭安裝的Genie U以自來水為進水產RO純水和超純水
穩(wěn)定可靠的水質
• 集合優(yōu)化的流路設計、技術先進的 EDI 模塊和樂楓LeFil 和OrganeFil 配方填料的超純化柱,純水和超純水水質達到或超過相關實驗室用水標準;
• 配備RephiBio 終端過濾器,可有效去除水中的熱原(內毒素)、核酸酶、細菌等雜質,滿足核酸電泳實驗用水要求。
用戶體驗佳
• 觸控屏采用高靈敏度防水屏幕,可帶乳膠手套操作
• 采用智能IT技術,取水手柄與主機可無線連接,取水點與主機的距離不受電線長度的限制,讓您享受“無線 · 自由”的用水體驗;
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樂楓生物(Rephile Bioscience,Ltd.) 是一家專業(yè)從事水純化和實驗室分離純化產品研發(fā)、設計和制造的企業(yè),為高科技生物技術和生命科學領域的用戶服務。樂楓公司著眼于發(fā)展,在中國、美國、法國、印度、南非等近20個國家建立了銷售機構,同時也為大型公司提供OEM和ODM,產品銷往包括歐美的近100個國家。成立十余年,樂楓持續(xù)投入研發(fā),創(chuàng)立出了自己的產品品牌RephiLe(瑞楓),推出了多個新概念產品- 無線連接的Genie系列純水系統(tǒng)和智能型大流量純水工作站Super-Genie等。目前樂楓純化柱填料配方齊全,也提供多款密理博純水系統(tǒng)的兼容耗材。
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